Vedelikkromatograafia kvantitatiivse analüüsi põhimõtted ja meetodid

Vedelikkromatograafia eraldusmehhanism põhineb segu komponentide afiinsuse erinevusel kahe faasi suhtes.

Erinevate statsionaarsete faaside järgi jaguneb vedelikkromatograafia vedelik-tahke kromatograafiaks, vedelik-vedelikkromatograafiaks ja sidefaasikromatograafiaks.Kõige laialdasemalt kasutatavad on vedelik-tahke kromatograafia täiteainena silikageeliga ja sidefaasikromatograafia mikroränidioksiid maatriksiga.

Statsionaarse faasi vormi järgi võib vedelikkromatograafia jagada kolonnkromatograafiaks, paberkromatograafiaks ja õhekihikromatograafiaks.Adsorptsioonivõime järgi võib selle jagada adsorptsioonikromatograafiaks, jaotuskromatograafiaks, ioonvahetuskromatograafiaks ja geelkromatograafiaks.

Viimastel aastatel on vedeliku kolonnkromatograafia süsteemi lisatud kõrgsurve vedeliku voolusüsteem, et liikuv faas voolaks kiiresti kõrge rõhu all, et parandada eraldusefekti, nii et kõrge efektiivsusega (tuntud ka kui kõrgsurve) vedelikkromatograafia on tekkinud.

OSA
01 Vedelikkromatograafia kvantitatiivse analüüsi põhimõte

Kvalitatiivsel alusel kvantifitseerimiseks on standardiks vaja puhtaid aineid;

Vedelikkromatograafia kvantitatiivne määramine on suhteliselt kvantitatiivne meetod: see tähendab, et analüüdi kogust segus hinnatakse teadaoleva koguse puhta standardproovi põhjal.

OSA
02 Vedelikkromatograafia abil kvantifitseerimise alus

Mõõdetava komponendi (W) kogus on võrdeline vastuse väärtusega (A) (piigi kõrgus või pindala), W=f×A.

Kvantitatiivne parandustegur (f): see on kvantitatiivse arvutusvalemi proportsionaalsuskonstant ja selle füüsikaline tähendus on mõõdetud komponendi kogus, mis on esindatud ühikulise vastuse väärtusega (piigi pindala).

Kvantitatiivse parandusteguri saab teadaoleva standardproovi koguse ja selle vastuse väärtuse põhjal.

Mõõtke tundmatu komponendi vastuse väärtus ja komponendi koguse saab kvantitatiivse parandusteguri abil.

OSA
03 Kvantitatiivse analüüsi üldmõisted

Proov (proov): lahus, mis sisaldab analüüti kromatograafiliseks analüüsiks.Jaotatud standard- ja tundmatuteks proovideks.

Standard: puhas toode, mille kontsentratsioon on teada.Tundmatu proov (tundmatu): segu, mille kontsentratsiooni tuleb katsetada.

Proovi kaal: testitava proovi algne kaal.

Lahjendus: tundmatu proovi lahjendustegur.

Komponent : kvantitatiivselt analüüsitav kromatograafiline piik, st analüüt, mille sisaldus on teadmata.

Komponendi kogus (kogus): uuritava aine sisaldus (või kontsentratsioon).

Terviklikkus: arvutusprotsess kromatograafilise piigi piigi pindala mõõtmiseks arvuti abil.

Kalibreerimiskõver: komponendi sisalduse ja vastuse väärtuse lineaarne kõver, mis saadakse teadaoleva standardaine koguse põhjal ja mida kasutatakse analüüdi tundmatu sisalduse määramiseks.

OSA
04 Vedelikkromatograafia kvantitatiivne analüüs

1. Valige kvantitatiivseks analüüsiks sobiv kromatograafiline meetod:

l Kinnitage tuvastatud komponendi tipp ja saavutage eraldusvõime (R) suurem kui 1,5

l Määrake testitud komponentide kromatograafiliste piikide konsistents (puhtus).

l Määrata kindlaks meetodi avastamispiir ja kvantifitseerimispiir;tundlikkus ja lineaarne ulatus

2. Koostage erineva kontsentratsiooniga standardproovidega kalibreerimiskõver

3. Kontrollige kvantitatiivsete meetodite täpsust ja täpsust

4. Kasutage proovide kogumise, andmetöötluse ja tulemuste raporteerimiseks vastavat kromatograafiahaldustarkvara

OSA
05 Kvantitatiivsete piikide tuvastamine (kvalitatiivne)

Kvalitatiivselt identifitseerige iga kvantifitseeritav kromatograafiline piik

Esmalt kasutage standardproovi, et määrata kindlaks kvantifitseeritava kromatograafilise piigi retentsiooniaeg (Rt).Retentsiooniaega võrreldes leidke tundmatu proovi igale kromatograafilisele piigile vastav komponent.Kromatograafiliseks kvalitatiivseks meetodiks on retentsiooniaja võrdlemine standardprooviga.Kriteerium Ebapiisavtäiendav kinnitus (kvalitatiivne)

1. Standardne liitmismeetod

2. Kasutage samaaegselt muid meetodeid: muid kromatograafilisi meetodeid (muutke mehhanismi, näiteks: erinevate kromatograafiliste kolonnide kasutamine), teisi detektoreid (PDA: spektri võrdlus, spektriteegi otsing; MS: massispektri analüüs, spektri raamatukogu otsing)

3. Muud vahendid ja meetodid

OSA
06 Kvantitatiivse piigi järjepidevuse kinnitus

Kinnitage kromatograafilise piigi konsistents (puhtus)

Veenduge, et iga kromatograafilise piigi all oleks ainult üks mõõdetud komponent

Kontrollige kaaselueeruvate ainete (lisandite) häireid

Kromatograafilise piigi konsistentsi (puhtus) kinnitamise meetodid

Spektrogrammide võrdlemine fotodioodmaatriksi (PDA) detektoritega

Puhtuse tipu tuvastamine

2996 Puhtusnurga teooria

OSAS 07 tavaliselt kasutatavad kvantitatiivsed meetodid

Standardkõvera meetod, mis on jagatud välisstandardmeetodiks ja sisestandardmeetodiks:

1. Välisstandardi meetod: kasutatakse enim vedelikkromatograafias

Valmistati teadaolevate kontsentratsioonidega standardproovide seeria, kasutades standardproovidena testitavate ühendite puhtaid proove.süstitakse kolonni kuni vastuse väärtuseni (piigi pindala).
Teatud vahemikus on standardproovi kontsentratsiooni ja vastuse väärtuse vahel hea lineaarne seos, nimelt W= f×A , ning koostatakse standardkõver.

Täpselt samades katsetingimustes sisestage tundmatu proov, et saada mõõdetava komponendi vastuse väärtus.Tuntud koefitsiendi f järgi on võimalik saada mõõdetava komponendi kontsentratsioon.

Välise standardmeetodi eelised:lihtne toiming ja arvutus, see on tavaliselt kasutatav kvantitatiivne meetod;ei ole vaja iga komponenti tuvastada ja elueerida;standardproov on nõutav;standardproovi ja tundmatu proovi mõõtmistingimused peaksid olema järjepidevad;süstimismaht peaks olema täpne.

Välise standardmeetodi puudused:Katsetingimused peavad olema kõrged, näiteks detektori tundlikkust, voolukiirust ja liikuva faasi koostist ei saa muuta;iga süsti maht peaks olema hea korratavusega.

2. Sisestandardi meetod: täpne, kuid tülikas, kasutatakse enim standardmeetodites

Segastandardi saamiseks lisatakse standardile teadaolev kogus sisestandardit ja valmistatakse teadaoleva kontsentratsiooniga tööstandardeid.Standardi ja sisestandardi molaarsuhe segastandardis jääb muutumatuks.Süstige kromatograafilisse kolonni ja võtke vastuse väärtuseks (standardproovi piigi pindala/sisestandardproovi piigi pindala).Vastavalt lineaarsele seosele vastuse väärtuse ja tööstandardi kontsentratsiooni vahel, nimelt W= f×A , koostatakse standardkõver.

Tundmatule proovile lisatakse teadaolev kogus sisestandardit ja süstitakse kolonni, et saada mõõdetava komponendi reaktsiooniväärtus.Tuntud koefitsiendi f järgi on võimalik saada mõõdetava komponendi kontsentratsioon.

Sisestandardi meetodi omadused:Toimingu ajal segatakse proov ja sisestandard kokku ja süstitakse kromatograafilisse kolonni nii kaua, kuni mõõdetud komponendi ja sisestandardi koguse suhe segatud lahuses on konstantne, muutub proovi maht. ei mõjuta kvantitatiivseid tulemusi..Sisestandardi meetod kompenseerib proovi mahu ja isegi mobiilse faasi ja detektori mõju, seega on see täpsem kui välisstandardmeetod.

OSA
08 Kvantitatiivse analüüsi tulemusi mõjutavad tegurid

Halva täpsuse põhjuseks võivad olla:

Vale piigi pindala integreerimine, proovi lagunemine või proovi ettevalmistamise käigus tekkinud lisandid, prooviviaal pole suletud, proovi või lahusti lendumine, proovi vale ettevalmistamine, proovi süstimise probleemid, sisestandardi vale ettevalmistamine

Halva täpsuse võimalikud põhjused:

Vale piikide integreerimine, süstimise või injektori probleemid, proovi lagunemine või proovi ettevalmistamise käigus tekkinud lisandid, kromatograafilised probleemid, halvenenud detektori reaktsioon