Mobiilne faas on samaväärne vere vedela faasiga, ja kasutamisel tuleb tähelepanu pöörata mitmetele asjadele. Nende hulgas on mõned "lõksud", millele tuleb tähelepanu pöörata.
01. Mõõtke liikuva faasi pH pärast orgaanilise lahusti lisamist
Kui mõõdate pH-d orgaanilise lisandiga, on saadud pH teistsugune kui enne orgaanilise lahusti lisamist. Kõige tähtsam on siiski olla järjepidev. Kui mõõdate pH-d alati pärast orgaanilise lahusti lisamist, märkige kindlasti oma sammud kasutatavas meetodis, et teised järgiksid sama meetodit. See meetod ei ole 100% täpne, kuid hoiab vähemalt meetodi järjepidevana. See võib olla olulisem kui täpse pH väärtuse saamine.
02. Puhvrit ei kasutata
Puhvri eesmärk on kontrollida pH-d ja vältida selle muutumist. Paljud teised meetodid muudavad liikuva faasi pH-d, mis võib põhjustada nihkeid retentsiooniajas, piigi kujus ja piigi vastuses.
Sipelghape, TFA jne ei ole puhvrid
03. Puhvrit ei kasutata normaalses pH vahemikus
Iga puhvri laius on 2 pH ühikut, mille piires see tagab parima pH stabiilsuse. Sellest aknast väljapoole jäävad puhvrid ei taga tõhusat vastupanu pH muutustele. Kasutage kas õiges vahemikus puhvrit või valige puhver, mis katab vajaliku pH vahemiku.
04. Lisage orgaanilisele lahusele puhver
Puhverlahuse segamine orgaanilise faasiga põhjustab suure tõenäosusega puhvri sadestumist. Paljudel juhtudel on isegi sademeid siiski raske tuvastada. Ärge unustage alati lisada vesifaasile orgaanilist lahust, mis võib oluliselt vähendada puhvrisadenemise võimalust.
05. Segage kontsentratsioonigradient alates 0% pumbaga
Tänapäeval saadaolevad pumbad võivad tõhusalt segada liikuvaid faase ja degaseerida, kuid mitte kõigil, kes teie meetodit kasutavad, pole kvaliteetset pumpa. Segage A ja B üheks lahuseks ja käivitage see 100% inline.
Näiteks 950 ml orgaanilist lähtesegu saab valmistada segades 50 ml veega. Selle eeliseks on see, et see võib vähendada HPLC-de vahelist varieeruvust ning vähendada mullide ja sademete tekkimise võimalust süsteemis. Tasub teada, et pumbasegu suhe on 95:5, mis ei tähenda, et eelsegatud säilivusaeg pudelis oleks samuti 95:5.
06. Puhvri muutmiseks ei kasutata õiget modifitseeritud hapet (aluseid).
Kasutage ainult seda hapet või alust, mis moodustab kasutatava puhversoola. Näiteks naatriumfosfaatpuhver tuleks valmistada ainult fosforhappe või naatriumhüdroksiidiga.
07. Meetodis puhvri kohta kogu teabe esitamata jätmine, näiteks 5 g lisaminenaatriumfosfaat 1000 ml vee kohta.
Puhvri tüüp määrab pH vahemiku, mida saab puhverdada. Vajalik kontsentratsioon määrab puhvri tugevuse. 5 grammil või veevabal naatriumfosfaadil ja 5 grammil mononaatriumfosfaatmonohüdraadil on erinev puhvri tugevus.
08. Orgaaniliste lahustite lisamine enne kontrollimist
Kui eelmise meetodi puhul kasutati lähtetaseme B jaoks puhverlahust ja teie meetodis kasutati lähtetaseme B jaoks orgaanilist lahust, saate loodetavasti puhvri pumba torustikus ja pumbapeas settida.
09. Tõstke pudel üles ja tühjendage viimane tilk
On suur võimalus, et teil pole kogu jooksu läbimiseks piisavalt mobiilset faasi ja teie proov suitseb. Lisaks pumbasüsteemi ja kolonni läbipõlemise võimalusele aurustub liikuv faas täielikult ja pudeli ülaosas olev liikuv faas muutub.
10. Kasutage ultraheli degaseerimise liikuvat faasi
Kõige tähtsam on veenduda, et kõik puhversoolad on lahustunud, kuid see on halvim viis degaseerimiseks ja see soojendab kiiresti liikuva faasi, põhjustades orgaaniliste komponentide aurustumist. Hilisemate tarbetute probleemide säästmiseks võtke viis minutit oma mobiilfaasi vaakumfiltreerimiseks.
Postitusaeg: 27. august 2024